1 菌落總數(shù)檢測板原理及適用范圍
菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過處理,在一定條件下培養(yǎng)后所得1 mL(g)檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù),是zui常用的微生物檢測項(xiàng)目。菌落總數(shù)檢測板是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品,含有標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基,吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑(TTC),菌落在檢測板上呈紅色,這樣可縮短計(jì)數(shù)時間和增強(qiáng)計(jì)數(shù)效果。本產(chǎn)品適合于各類食品及食品原料中菌落總數(shù)的測定。執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn):《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 菌落總數(shù)測定》(GB 4789.2)。
2 菌落總數(shù)檢測板操作方法
2.1 樣品處理:取樣品 25 mL(g)放入含有225 mL滅菌磷酸緩沖稀釋液(或生理鹽水)的取樣罐或均質(zhì)袋內(nèi),制成1:10的樣品勻液,必要時用1 mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)樣品勻液pH至6.6~7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1 mL,注入含有9 mL稀釋液的試管內(nèi),振搖后成為1:100的樣品勻液,以此類推,做出1:1000等稀釋度的樣品勻液,每次換一支吸管。
2.2 接種:一般食品選2~3個稀釋度進(jìn)行檢測,含菌量少的液體樣品(如飲用純水和礦泉水等)可直接吸取原液進(jìn)行檢測。將菌落總數(shù)檢測板置于平坦實(shí)驗(yàn)臺面,揭開上層膜,用無菌吸管吸取1 mL樣品勻液滴加到檢測板內(nèi),迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板,讓樣品勻液均勻吸附在濾紙上,靜置10s左右,待樣品勻液*被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。
2.3 培養(yǎng):將檢測板疊在一起,倒置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)。一般食品培養(yǎng)溫度為36℃±1℃,培養(yǎng)15~24 h;水產(chǎn)品培養(yǎng)溫度為30℃±1℃,培養(yǎng)48 h。
3 結(jié)果判讀
細(xì)菌在檢測板上生長后會顯示紅色斑點(diǎn),選擇菌落數(shù)適中(30~300 CFU)的檢測板進(jìn)行計(jì)數(shù),乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升(或每克)樣品中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。
4 附加說明
4.1 菌落總數(shù)檢測板檢測結(jié)果與傳統(tǒng)平板計(jì)數(shù)瓊脂平板法符合率可達(dá)90%以上。
4.2 磷酸緩沖液稀釋液的配制與滅菌:貯存液:稱取34.0 g分析純磷酸二氫鉀(KH2PO4)溶于500 mL蒸餾水或純凈水中,用大約175 mL的1 mol/L氫氧化鈉(NaOH)溶液調(diào)節(jié)PH至7.2,用蒸餾水稀釋至1000 mL后貯存于冰箱。稀釋液:取貯存液1.25 mL,用蒸餾水稀釋至1000 mL,分裝于適宜容器中,121℃高壓滅菌15 min,或放入消毒碗柜中消毒。
4.3 生理鹽水的配制與滅菌:取8.5 g分析純氯化鈉(NaCl)溶解到1000 mL蒸餾水或純凈水中,分裝于適宜容器中,121℃高壓滅菌15 min,或放入消毒碗柜中消毒。
4.4 注意使用過的檢測板上帶有活菌,需及時按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。
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